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人肝细胞生长因子HGF酶联免疫试剂盒说明书?

日期:2025-03-11 13:47:32

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以下是一份人肝细胞生长因子 HGF 酶联免疫试剂盒说明书示例:

1、基本信息
    产品名称:人肝细胞生长因子(HGF)ELISA 试剂盒
    英文名称:Human Hepatocyte Growth Factor (HGF) ELISA Kit
    检测方法:ELISA 酶联免疫吸附法
    实验类型:双抗体夹心法
    应用:仅用于科研,不能用于临床诊断
    适应物种:人
    保存条件:2-8℃
    有效期:6 个月


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2、试剂盒组成

试剂盒成份 96 孔配置 48 孔配置
酶标板 1 块板(96T) 半块板(48T)
塑料膜板盖 1 块 半块
标准品 1 瓶(0.6ml) 1 瓶(0.3ml)
空白对照 1 瓶(1.0ml) 1 瓶(0.5ml)
标准品稀释缓冲液 1 瓶(5ml) 1 瓶(2.5ml)
生物素标记的抗 HGF 抗体 1 瓶(6ml) 1 瓶(3.0ml)
亲和链酶素 - HRP 1 瓶(10ml) 1 瓶(5.0ml)
洗涤缓冲液 1 瓶(20ml) 1 瓶(10ml)
底物 A 1 瓶(6.0ml) 1 瓶(3.0ml)
底物 B 1 瓶(6.0ml) 1 瓶(3.0ml)
终止液 1 瓶(6.0ml) 1 瓶(3.0ml)


3、样本类型及处理

    血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
    血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
    尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
    细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
    组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

4、检测范围

    不同品牌检测范围有所不同,如华美生物在说明书中特别指出具体检测范围的常规值;cusabio为 15.6 pg/mL-1000 pg/mL。

5、操作步骤

    试剂准备:标准品系列稀释在实验时准备,不能储存,稀释前振荡混匀;洗涤缓冲液用蒸馏水 50 倍稀释。
    加样:根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,标准品和空白孔建议做复孔。加入稀释好后的标准品 50μl 于反应孔、加入待测样品 50μl 于反应孔内,立即加入 50μl 的生物素标记的抗体,盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育 1 小时。
    洗涤:甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡 30 秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干,重复 3 次,若用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
    加酶:每孔加入 80μl 的亲和链酶素 - HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育 30 分钟。
    再次洗涤:操作同步骤 3。
    显色:每孔加入底物 A、B 各 50μl,轻轻振荡混匀,37℃温育 10 分钟,避免光照。
    终止:取出酶标板,迅速加入 50μl 终止液,加入终止液后应立即测定结果。
    测定:在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

6、注意事项

    试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
    浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
    各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内,如标本数量多,使用排枪加样。
    请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高,需稀释后再测定,计算时乘以总稀释倍数。
    封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    底物请避光保存。
    严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
    所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
    本试剂不同批号组分不得混用。
    避免直接接触终止液和底物 A、B,一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。